β-N-acetylglucosaminidase

-N-acetylglucosaminidase (NAG) hydrolyseert -N-acetylglucosaminide en hydrolyseert -N-acetylgalactosamine. Het enzym is op grote schaal aanwezig in verschillende weefsels, organen, lichaamsvloeistoffen en bloedcellen en is een zure hydrolase in lysosomen. De meetmethoden zijn colorimetrie en fluorometrie. Basis informatie Specialistenclassificatie: urineonderzoek classificatie: biochemisch onderzoek Toepasselijk geslacht: of mannen en vrouwen nuchter zijn: vasten Analyse resultaten: Hieronder normaal: Rare. Normale waarde: Serum P-N-acetylglucosaminidase: 15.14-27.94 U / L Boven normaal: Nierbuisziekte zware metalen (kwik, lood, cadmium, enz.) En door geneesmiddelen veroorzaakte nierschade, ischemie, hypoxie, bloedverlies, shock, enz. Kunnen een toename van NAG-activiteit veroorzaken. negatief: positief: Tips: Afhankelijk van de voedingsstatus van het hele lichaam, worden melk, eieren, fruit, sojamelk, enz. In de maaltijd gegeven. Normale waarde 1, p-nitrofenol colorimetrische methode: serum NAG21.54 ± 6.4U / L, urine NAG is normaal verdeeld, de mediaan is 9.13U / g creatinine, de 95e percentiel bovengrens is 16.10U / g creatinine. 2. Fluorescentiemethode: Volwassen serum: 9,94 ± 2.O7U / L. Volwassen urine: 6,39 ± 3,19 U / LCre. Klinische betekenis De bepaling van NAG-activiteit in bloed en urine is gevoelig voor de veranderingen van nierparenchymale laesies, met name acuut letsel en actieve ziekte, en wordt voornamelijk gebruikt voor vroege monitoring van nierletsel en ziekteobservatie. 1, nierbuisaandoeningen zware metalen (kwik, lood, cadmium, enz.) En door geneesmiddelen veroorzaakte nierbeschadiging, ischemie, hypoxie, bloedverlies, shock, enz. Kunnen een toename van NAG-activiteit veroorzaken. 2, nefrotisch syndroom urine NAG vaak aanzienlijk toegenomen, de remissieperiode afgenomen, snel herstel bij herhaling, het kan worden gebruikt als een indicatie voor klinische observatie. De acute fase van glomerulonefritis varieert sterk, maar de verandering is kleiner dan die van nierbuisletsel. 3, de locatie van urineweginfectie diagnose van acute en chronische pyelonefritis urine NAG stijgen, kan worden onderscheiden van eenvoudige cystitis. Kan worden gebruikt voor de diagnose van vroege infecties van de bovenste urinewegen. 4, niertransplantatie afstoting monitoring niertransplantatie afstoting vroege NAG kan worden verhoogd, gevoeliger dan urine-eiwit, serumcreatinine, creatinineklaring. 5, vroege diagnose van diabetische nefropathie, diabetische nefropathie, verhoogde urine NAG, vroege diagnose van deze ziekte is beter dan urine-albumine en 2-microglobuline. Hoge resultaten kunnen ziekten zijn: nefrotisch syndroom, urineweginfecties (1) colorimetrische methode van p-nitrofenol: 1 Het substraat p-nitrofenol moet worden gezuiverd en voorgevormd bij 50 ° C gedurende 24 uur. De concentratie werd ingesteld op 0,04 mmol / L met 10 mmol / L NaOH, en de absorptiekromme werd gescand met een smalle bandbreedte spectrofotometer, Amax = 401 nm, volgens de IFCC-norm, Amax = 0,7316 tot 0,7388, en Emax = 18380 ± 90 (25 ° C). 2 De oplosbaarheid van het substraat is klein en moet bij het bereiden worden aangepast tot een pasta met een geschikte hoeveelheid pH 4,6 buffer en voeg de buffer vervolgens geleidelijk toe tot de vereiste hoeveelheid. 3 Wanneer de meetresultaten in het ultra-lineaire bereik liggen, moet het monster worden verdund met fysiologische zoutoplossing en opnieuw worden getest.Het resultaat wordt vermenigvuldigd met de verdunningsfactor. 4 Urine-enzymconcentratie wordt sterk beïnvloed door urinevolume, 24 uur urinevolume moet worden behouden. Als de enzymuitscheidingssnelheid wordt berekend door de verhouding van NAG / g creatinine, dat wil zeggen, dit wordt niet beïnvloed door concentratie of verdunning van urine en het is niet nodig om 24 uur urine te verlaten. (2) Fluorescentiemethode: 1 Fluorescentiemethode voor het meten van NAG heeft een huishoudelijke kit, die een hoge gevoeligheid heeft en niet wordt beïnvloed door urine. 2 Het kan ook worden gebruikt met Shanghai No.3 Analytical Instrument Factory om 930 fluorescentie fotometer, excitatiefilter 360 en emissiefilter (400 + 450) composiet te produceren, met bevredigende resultaten. 3 De concentratie van elke component in de enzymreactie-oplossing is: 1,33 mmol / L substraat, 20 mmol / L citroenzuur en 432 mmol / L Na2HPO. 4 Oplosmiddelen die in de reagentia worden gebruikt, moeten gedestilleerd water zijn, het substraat moet vrij zijn van 4-MU, BSA moet vrij zijn van het enzym of 2 uur worden verwarmd op 50 ° C. 5 NAG in serum is gedurende enkele uren tot enkele dagen stabiel bij 4 ° C en gedurende enkele maanden stabiel bij -20 ° C. Het urinespecimen was stabiel bij 4 ° C gedurende 1 week, en citraat-antistollingsplasma werd ook gebruikt. 6-N-acetylglucosaminide kan worden gekatalyseerd door twee enzymen, één is -N-acetylglucosaminidase (EC 3.2.1.30) en de andere is -N-acetylglucosidase (EC3) .2.1.52) Alleen EC3.2.1.30 of EC3.2.1.52 kan worden gedefinieerd voor gezuiverde enzymen. De NAG, waarnaar in de binnenlandse literatuur vaak wordt verwezen, is strikt vernoemd naar het gebruikte substraat, in plaats van de specificiteit van het enzym voor het substraat. Daarom wordt de huidige buitenlandse literatuur vaak aangeduid als -N-acetylglucosaminidase. Inspectie proces (1) p-nitrofenol colorimetrisch mengen, bij 405 nm golflengte, 1 cm optisch pad, gedestilleerd water nul, lees de absorptie van elke buis en controleer de standaardcurve met het verschil van (AU-AC). 1 Het substraat p-nitrofenol moet worden gezuiverd en voorgevormd bij 50 ° C gedurende 24 uur. De concentratie werd ingesteld op 0,04 mmol / L met 10 mmol / L NaOH, en de absorptiekromme werd gescand met een smalle bandbreedte spectrofotometer, Amax = 401 nm, volgens de IFCC-standaard, Amax = 0,7316 tot 0,7388 en E Amax = 18380 ± 90 (25 ° C). Molaire absorptiecoëfficiënt volgens p-nitrofenol 2 De oplosbaarheid van het substraat is klein en moet bij het bereiden worden aangepast tot een pasta met een geschikte hoeveelheid pH 4,6 buffer en voeg de buffer vervolgens geleidelijk toe tot de vereiste hoeveelheid. 3 Wanneer de meetresultaten in het ultra-lineaire bereik liggen, moet het monster worden verdund met fysiologische zoutoplossing en opnieuw worden getest.Het resultaat wordt vermenigvuldigd met de verdunningsfactor. 4 Urine-enzymconcentratie wordt sterk beïnvloed door urinevolume, 24 uur urinevolume moet worden behouden. Als de enzymuitscheidingssnelheid wordt berekend door de verhouding van NAG / g creatinine, dat wil zeggen, dit wordt niet beïnvloed door concentratie of verdunning van urine en het is niet nodig om 24 uur urine te verlaten. (2) Fluorescentiespectrofotometrie: verdun eerst serum of urine met een buffer die geen runderserumalbumine (BSA) bevat, Mix, de excitatiegolflengte is 364 nm, de emissiegolflengte is 448 nm om de vloeistof nulaanpassing te stoppen en de fluorescentie-intensiteit van de 6 mol / L 4-MU buis wordt aangepast tot 100, en de fluorescentie-intensiteit van de blanco buis en de meetbuis worden respectievelijk gemeten. 1 Fluorescentiemethode voor het meten van NAG heeft een huishoudelijke kit, die een hoge gevoeligheid heeft en niet wordt beïnvloed door urine. 2 Het kan ook worden gebruikt met Shanghai No.3 Analytical Instrument Factory om 930 fluorescentie fotometer, excitatiefilter 360 en emissiefilter (400 + 450) composiet te produceren, met bevredigende resultaten. 3 De concentratie van elke component in de enzymreactie-oplossing is: 1,33 mmol / L substraat, 20 mmol / L citroenzuur en 432 mmol / L Na2HPO. 4 Oplosmiddelen die in de reagentia worden gebruikt, moeten gedestilleerd water zijn, het substraat moet vrij zijn van 4-MU, BSA moet vrij zijn van het enzym of 2 uur worden verwarmd op 50 ° C. 5 NAG in serum is gedurende enkele uren tot enkele dagen stabiel bij 4 ° C en gedurende enkele maanden stabiel bij -20 ° C. Het urinespecimen was stabiel bij 4 ° C gedurende 1 week, en citraat-antistollingsplasma werd ook gebruikt. 6-N-acetylglucosaminide kan worden gekatalyseerd door twee enzymen, één is -N-acetylglucosaminidase (EC 3.2.1.30) en de andere is -N-acetylglucosidase (EC3) .2.1.52) Alleen EC3.2.1.30 of EC3.2.1.52 kan worden gedefinieerd voor gezuiverde enzymen. De NAG, waarnaar in de binnenlandse literatuur vaak wordt verwezen, is strikt vernoemd naar het gebruikte substraat, in plaats van de specificiteit van het enzym voor het substraat. Daarom wordt de huidige buitenlandse literatuur vaak aangeduid als -N-acetylglucosaminidase.