bacteriële endotoxinetest

De bacteriële endotoxinetest is om te bepalen of de bacteriële endotoxine in het testartikel aan de eisen voldoet. Endotoxine is een lipopolysacharide van de celwand van gramnegatieve bacteriën en de toxische component ervan is lipide A. De bacteriën stierven na desintegratie. Bacteriële endotoxinetests omvatten twee methoden, een gelmethode en een fotometrische methode, waarbij de laatste een turbidimetrische methode en een chromogene substraatmethode omvat. Bij het testen van de test kan een van de methoden voor de test worden gebruikt. Wanneer de meetresultaten controversieel zijn, zullen de resultaten van de gelmethode prevaleren, tenzij anders aangegeven. Basis informatie Specialistencategorie: Inspectiecategorie: Pathogeen microbiologisch onderzoek Toepasselijk geslacht: of mannen en vrouwen nuchter zijn: vasten Analyse resultaten: Hieronder normaal: Normale waarde: geen Boven normaal: negatief: De gel blijft niet intact en is negatief van de wand van de buis. positief: Positieve records die niet van de muur gleden, waren positief. Tips: de bacteriële endotoxinetest is om te bepalen of de bacteriële endotoxine in het testartikel aan de eisen voldoet. Normale waarde Het type en aandeel van de flora in het lichaam zijn normaal en het menselijk lichaam is in een dynamisch evenwicht. Klinische betekenis Het pyrogeen is voornamelijk een door bacteriën afgegeven endotoxine. Het pyrogeen komt het bloedcirculatiesysteem van het lichaam binnen en veroorzaakt een reeks bijwerkingen zoals koorts. Daarom is de injectie-pyrogeen- of bacteriële endotoxinetest een belangrijke kwaliteitsindex om de veiligheid van de injectie te waarborgen. Abnormaal resultaat Klinisch, wanneer een grote hoeveelheid infusie intraveneus wordt toegediend, heeft de patiënt symptomen van koude rillingen, hoge koorts, zweten, flauwvallen, braken binnen 0,5 tot 1 uur vanwege de aanwezigheid van pyrogenen in de medicijnoplossing.De lichaamstemperatuur kan 40 ° C bereiken tijdens hoge koorts. Ze kunnen zelfs shockeren. Positief resultaat kan ziekte zijn: overwegingen met Bacillus licheniformis enteritis Bij het vaststellen van de bacteriële endotoxinetestmethode, bij het berekenen van de endotoxinelimiet L, MVD en MVC, is het noodzakelijk aandacht te besteden aan belangrijke parameters zoals maximale humane dosis, productspecificaties, gevoeligheid van sputumreagens, enz., Omdat rekenfouten tot alle daaropvolgende inspanningen zullen leiden. Alles is mislukt. Veel voorkomende problemen zijn: 1. De klinische dosis wordt onjuist bepaald. Alleen de conventionele dosis wordt gebruikt. De maximaal mogelijke dosis en toedieningsweg van het menselijk lichaam worden niet in acht genomen. In de limietberekeningsformule L = K / M, vanwege de definitie van K-waarde en M-waarde. Vervaging maakt de toewijzing van K- en M-waarden onnauwkeurig, wat uiteindelijk leidt tot een onjuiste berekening van de limieten. Een injectie van een klinische volwassene wordt bijvoorbeeld toegediend 40 tot 80 mg per intraveneuze infusie en een baby (drie maanden of langer) wordt elke keer intraveneus toegediend met 10 tot 20 mg. De limiet van de dosis voor volwassenen (lichaamsgewicht 60kg) is 3,75EU / mg, terwijl het gewicht van de baby slechts ongeveer 5kg is, de berekende limiet is ongeveer 1,25EU / mg, als de maximale dosis per kilogram lichaamsgewicht niet in acht wordt genomen, de limiet voor de bacteriële endotoxine Er zal een groot verschil zijn. 2. De bacteriële endotoxinegrens van sommige aangegeven variëteiten wordt niet berekend op basis van de klinische dosering, maar wordt berekend op basis van de dosis van hetzelfde type pyrogeen-test, wat resulteert in een limietfout. 3. De bacteriële endotoxinegrens van sommige variëteiten werd overgenomen van de buitenlandse farmacopee, en het verschil tussen de klinische gebruiksdosis van de binnenlandse markt en het gewicht van de Chinezen en buitenlanders werd niet in overweging genomen en de limiet werd onjuist bepaald. 4. Valse berekening van de dagelijkse dosis (meerdere doses op één dag). 5. Wanneer de rasspecificatie (concentratie) verandert, wordt de MVD-berekening niet aangepast. 6. De maximale dosis die moet worden gebruikt om de methode vast te stellen, heeft de dosis in de kliniek overschreden. Inspectie proces Ten eerste, de titerbepaling Bacteriële endotoxinestandaarden zijn gekalibreerd als benchmarks om de equivalente potentie van het basisgewicht te bepalen. De titer per 1 mg werkstandaard moet niet minder zijn dan 2 EU, niet meer dan 50 EU, en experimentele gegevens met uniformiteit en stabiliteit. De titer wordt als volgt bepaald: Ten minste 4 monsters van elke batch van werkstandaard worden gebruikt, en dezelfde batch van sputumreagens en dezelfde standaard worden gebruikt. Elke werkstandaard wordt verdund met endotoxinetestwater * volgens het gewicht en het standaardproduct. Een reeks 2-voudige verdunningen van endotoxineoplossing wordt bereid en omgezet met hydrazinereagens. Wanneer de logaritme van het reactie-eindpunt van de vier werkstandaarden Wanneer de standaardafwijking (S) van het gemiddelde kleiner is dan 0,3365, wordt het geometrische gemiddelde (in ng / mg) van de reactie-eindpunten van de vier werkstandaarden en het reactie-eindpunt (in EU / mg) van de standaard berekend. Ten tweede, testvoorbereiding 1. De gebruiksvoorwerpen die in deze methode worden gebruikt, worden behandeld om eventueel aanwezig exogeen endotoxine te verwijderen. Droog braden bij 250 ° C gedurende 30 minuten of 180 ° C gedurende 2 uur kan ook worden gebruikt. Andere geschikte methoden kunnen ook worden gebruikt. De testoperatie moet microbiële besmetting voorkomen. 2. Controleer vóór de test de gevoeligheidswaarde van het batchnummer reagens, dat aan de vereisten moet voldoen. Voeg de hoeveelheid oplosmiddel van het hydrazinereagens toe. Na oplossing is het een guanidine-reagensoplossing en klaar voor gebruik. 3. Verdunning van het testmonster: wanneer de gevoeligheidswaarde van het batchnummer reagens lager is dan de interne giflimiet van het testmonster, bereken het dan met de volgende formule en gebruik het endotoxinetestwater * om het reagens te verdunnen voor inspectie. Verdunningsfactor van het testmonster = X / X: Beperkte endotoxinelimiet (EU / ml) : gevoeligheidswaarde van het testmiddel voor het testmiddel (EU / ml) Ten derde, check 4 × 75 mm reageerbuis (of 0,1 ml / set originele ampul van sputumreagens) met 0,1 ml sputumreagensoplossing, waarvan er 2 zijn toegevoegd met 0,1 ml voor de reageerbuis en 1 voor de 2 endotoxine-werkstandaard 0,1 ml werd gebruikt als een positieve controle buis en 0,1 ml van een oplossing van sputumreagens werd toegevoegd als een negatieve controle buis. Na voorzichtig mengen van de reageerbuizen werd de buis gesloten en gedurende 60 ± 2 minuten verticaal in een waterbad van 37 ± 1 ° C geplaatst. Wees voorzichtig wanneer u de buis vasthoudt en de buis neemt om negatieve resultaten als gevolg van trillingen te voorkomen. (4) Beoordeling van de resultaten De buis werd voorzichtig uit het waterbad verwijderd en langzaam omgedraaid bij 1800. De gel in de buis was niet vervormd. De positieve was niet uit de buiswand getrokken. (+) De gel kon niet intact blijven en was negatief van de buiswand. (a). Als reageerbuis 2 (1) is, wordt deze geacht te voldoen aan de voorschriften en wordt de pyrogeen-testmethode (methode met konijn) niet uitgevoerd. Als beide buizen (+) zijn, moeten ze worden geacht niet te voldoen aan de voorschriften. Bijvoorbeeld, 1 buis in 2 buizen is (+) en 1 buis is (1). Volgens de beschreven methode worden 4 buizen opnieuw getest. Eén buis in 4 buizen is (+), wat betekent dat deze niet in overeenstemming is met de voorschriften. Tenzij in de tekst anders is bepaald, worden de testartikelen die aan de eisen voldoen getest volgens de pyrogeen-testmethode (de konijnenmethode) en beoordeeld op basis van de resultaten. De limiet van bacterieel endotoxine in het testartikel moet in overeenstemming zijn met de bepalingen van de respectieve artikelen. De positieve controle was (1) of de negatieve controle was (+) en de test was niet effectief. Bijlage: Bacteriële endotoxinetest voor steriel water voor injectie, water voor injectie, natriumchloride-injectie, 5% en 10% glucose-injectie. Niet geschikt voor het publiek Over het algemeen geen taboes. Bijwerkingen en risico's Over het algemeen geen kwaad.