Vruchtwatercelkweek chromosoomonderzoek

Vanwege schadelijke chemicaliën, blootstelling aan röntgenstraling, omgevingsfactoren, gevorderde zwangerschap, naaste familieleden, enz., Wat leidt tot ziekten die worden veroorzaakt door de variatie in het aantal, de morfologie, de structuur en de combinatie van chromosomen tijdens de zwangerschap. Chromosoomonderzoek van vruchtwatercellen heeft een grote specifieke betekenis voor prenatale diagnose van chromosomale ziekten. Basis informatie Specialistencategorie: Maternaal onderzoek Controleer categorie: Genetisch onderzoek (DNA) Toepasselijk geslacht: of vrouwen nuchter zijn: vasten Analyse resultaten: Hieronder normaal: Normale waarde: geen Boven normaal: negatief: Totaal aantal chromosomen: 46. Autosome: 22 paren (nummer 1-22). Geslachtschromosomen: XY voor mannen en XX voor vrouwen. Mannelijk karyotype: 46, XY. Vrouwelijk karyotype: 46, XX. positief: Resultaten die verschillen van de normale waarden zijn positief, wat wijst op een aangeboren afwijking of andere aangeboren ziekte. Tips: Chromosoomonderzoek moet monsters van het vruchtwater nemen bij 16-20 weken zwangerschap. Normale waarde Het totale aantal chromosomen is 46. 22 paar autosomen (genummerd van 1 tot 22). Het geslachtschromosoom mannetje is XY en het vrouwtje is XX. Mannelijk karyotype 46, XY. Vrouwelijk karyotype 46, XX. Klinische betekenis Abnormaal chromosoomnummer zoals het syndroom van Down (trisomie 21), trisomie 18, trisomie, trisomie 38, trisomie 21, congenitaal testiculair hypoplasiesyndroom, XXY-synthese Teken, syndroom van Turner, syndroom van X-trisomie en syndroom van meerdere X-lichamen. Abnormale chromosoomstructuur zoals 4p gedeeltelijk monomeer syndroom, 5p gedeeltelijk monomeer syndroom, 9p gedeeltelijk trisomie syndroom, 9q gedeeltelijk monomeer syndroom, 21q gedeeltelijk monomeer syndroom, 22q gedeeltelijk monomeer syndroom, 22q gedeeltelijke monomeer syndroom, 22q gedeeltelijke trisomie Syndroom, etc. Positieve resultaten kunnen ziekten zijn: congenitale ovariële hypoplasie, pediatrische cerebrale parese, pediatrisch Downsyndroom, pediatrische cerebrale parese, pediatrisch pascal syndroom, Diggolger-syndroom, pediatrisch miauwsyndroom, pediatrische congenitale testiculaire ontwikkeling Onvolledige overwegingen met betrekking tot genetische ziekten 1. Chromosoomonderzoek moet monsters van het vruchtwater nemen bij 16-20 weken zwangerschap. 2, deze aangeboren genetische ziekten zijn toegenomen, ontbreken, translocatie, inversie en andere kwantitatieve en structurele afwijkingen, vaak gemanifesteerd als een syndroom. De meeste gevallen, zoals meerdere misvormingen, groeiachterstand en mentale retardatie, leiden tot foetale abortus, vroeggeboorte of doodgeboorte. Inspectie proces (1) Neem 15 tot 30 ml vruchtwater gedurende 16 tot 20 weken zwangerschap en centrifugeer gedurende 10 minuten bij 1000 r / ml. (2) Gooi de overtollige bovenstaande vloeistof weg, laat 1 ml vruchtwater en geprecipiteerde cellen en dispergeer voorzichtig in een celsuspensie. (3) Breng over in een vierkante kweekkolf van 25 ml, voeg 3 ml van een medium met een pH van 6,5 tot 6,8 (met penicilline 100 U / ml, streptomycine 100 g / ml) en 1 ml kalfsserum toe en incubeer in een incubator bij 37 ° C. (4) Een groot aantal fibroblastachtige of epithelioïde celkolonies werd waargenomen na 7-10 dagen kweken. Het verse medium kan nu worden vervangen. (5) Wanneer de celkolonies in stukken worden uitgebreid en er veel doorschijnende circulaire delende cellen zijn, kan colchicine worden toegevoegd om de uiteindelijke concentratie 0,1-0,3 g / ml te maken en vervolgens gedurende 5-6 uur in een incubator bij 37 ° C worden gekweekt. (De bovenstaande procedures worden allemaal uitgevoerd onder aseptische omstandigheden). Oogststandaarden: 1 met fibroblasten als hoofdtype, de groei van de cellen; 2 met 10x oculairs en 20x objectieve observatie, de groeiende celklonen bestrijken 1 of meer complete gezichtsvelden; 3 zie meer dan 10 doorschijnend Ronde cellen en meer dan 10 dubbele ronde helder delende cellen. (6) Als de cellen niet krachtig groeien, de groeicyclus niet uniform is of de cellen verouderen en de oogststandaard niet wordt bereikt, kan de subcultuur worden voortgezet in de originele fles. Methode: Onder steriele omstandigheden werd de kweekoplossing eerst gegoten en werden enkele druppels 2,5 g / L steriele trypsine-oplossing toegevoegd en het mengsel werd geschud en gegoten. Verder werden 5 tot 10 druppels trypsine toegevoegd en voorzichtig gedurende ongeveer 5 minuten bij 37 ° C geschud om de hechtende cellen eraf te laten vallen. 4 ml vers medium met kalfsserum werd toegevoegd en de cultuur liet men 4 tot 5 uur bij 37 ° C staan. Verander het kweekmedium voorzichtig en zet de kweek voort, het kan 3 tot 5 dagen na de passage worden geoogst. (7) Breng de kweekoplossing over in een gegradueerde centrifugebuis, voeg 1 ml ED-TA-trypsine-oplossing toe aan de kolf, plaats deze gedurende 5 minuten in een incubator bij 37 ° C en spoel vervolgens de hechtende cellen met een elleboogpipet (2,5 g / kan ook worden gebruikt) L digestie met trypsine-oplossing). De cellen losgemaakt van de fleswand werden in een centrifugebuis gegoten, gemengd met de oorspronkelijke kweekvloeistoffase, en de kweekkolf werd gewassen met een kleine hoeveelheid warme fysiologische zoutoplossing, en de gewassen cellen werden ook in de centrifugebuis gegoten en 10 min gecentrifugeerd met 1000 r / min. (8) Zuig het supernatant op, voeg 3 tot 5 ml 0,075 mol / L KCl hypotone oplossing toe die voorverwarmd is op 37 ° C en stel deze gedurende 10 tot 15 minuten in op 37 ° C. (9) Pre-fixatie, fixatie en voorbereiding zijn hetzelfde als de bereidingsmethode van chromosoommonsters van perifere bloedcellen. Niet geschikt voor het publiek 1. Er waren tekenen van abortus tijdens de zwangerschap. 2. Wanneer de lichaamstemperatuur 37,5 ° C overschrijdt. 3. Vroege peeling van de placenta, buikinfectie en etterig. Bijwerkingen en risico's (1) Maternaal letsel: punctie naald steek wond bloedvaten veroorzaakt door abdominale wand hematoom baarmoeder subserosaal hematoom. Af en toe komt vruchtwater in de bloedcirculatie van de moeder vanuit het gaatje en veroorzaakt vruchtwaterembolie. De blaas werd niet geleegd vóór de punctie en de blaas was gewond. (2) Letsel van de foetus, placenta en navelstreng: de priknaald kan de foetus beschadigen en kan bloedingen veroorzaken, en de placenta en de navelstreng kunnen ook bloeden of hematoom veroorzaken. Daarom moet de bron van bloedingen worden geïdentificeerd bij het nemen van hemorragisch vruchtwater. Als u vermoedt dat u van een foetus bent, moet u blijven luisteren naar het foetale hart. (3) Lekkage van vruchtwater: postoperatief vruchtwater lekt uit het gaatje, veroorzaakt te weinig vruchtwater, beïnvloedt de ontwikkeling van de foetus en veroorzaakt zelfs een miskraam of vroeggeboorte. (4) abortus of vroeggeboorte: de incidentie van abortus of voortijdige bevalling is 0,1% -0,2%, treedt vaak op binnen een week na de operatie, zelfs na de punctie leidt voortijdige breuk van membranen tot voortijdige bevalling. (5) intra-uteriene infectie: er kan maternale koorts zijn na een operatie. Intra-uteriene infectie kan een abnormale ontwikkeling van de foetus of zelfs de dood van de foetus veroorzaken. Daarom moet een vruchtwaterpunctie strikt aseptisch zijn.