hemoglobine elektroforese

Verschillende iso-elektrische punten van verschillende hemoglobine hebben verschillende positieve en negatieve ladingen in een bepaalde pH-buffer en het hemoglobine beweegt in verschillende richtingen na elektroforese. Basis informatie Specialistenclassificatie: classificatie van groei- en ontwikkelingsonderzoek: bloedonderzoek Toepasselijk geslacht: of mannen en vrouwen nuchter zijn: vasten Tips: Voor het onderzoek is het dieet licht en is alcohol verboden. Normale waarde De elektroforesemethode was HbA 95%, HbA 21,1% tot 3,2% en HbA 32% tot 3%. De Singer-methode heeft een HbF <4%. Klinische betekenis 1, het hoofdbestanddeel is HbS, en geen HbB, kan worden gezien bij hemoglobineziekte van sikkelcellen. 2, HbS, HbF en HbA2 namen licht toe, terwijl HbA zelden of verdwenen, in combinatie met het onderzoek kan worden gediagnosticeerd als HbS--mariene bloedarmoede, gebruikelijker in de Middellandse Zee. 3, naast HbS, dat 10% -30% HbA en licht verhoogde HbF en HbA2 bevat, kan ook HbS--zee-anemie worden overwogen. 4. HbS is goed voor 20% -30%, HbA is goed voor 65% -75% en bevat normaal HbF en HbA2, die kunnen worden gediagnosticeerd als HbS--marine anemie. 5, HbA verdwijnt, HbC is goed voor 28% -44% van de totale hemoglobine, kan worden gediagnosticeerd als hemoglobine, vaker voor bij zwarte mensen, meer doelcellen kunnen worden gezien in bloed. 6, er is HbS, HbD verschijnt ook, er zijn doelcellen in de bloedfilm, kan worden gediagnosticeerd als hemoglobine D-ziekte, vaker in Noord-China. 7, HbE resulteert in elektroforese, kan worden gediagnosticeerd als hemoglobine E-ziekte, voornamelijk te vinden in Zuidoost-Azië, India, enz., China komt vaker voor in het zuiden van Guangdong. voorzorgsmaatregelen Wasachtige zure vezelmembraanelektroforese directe colorimetrie Reagens: elektroforese met micro-hemoglobine van celluloseacetaatmembraan. Operation: (1) Het celluloseacetaatmembraan werd gesneden in 1/3 (4 cm x 8 cm) in TEB-buffer gedurende 10 minuten of meer. (2) Verwijder de celluloseacetaatfilm en gebruik een filterpapier om overtollig water te verwijderen. 10 ul van 100 g / l opgelost bloed werd geabsorbeerd door een Hb-pipet en uniform aangebracht op de onderrand van de glazen duwer en werd op de matte zijde geplaatst op een afstand van 1,5 tot 2,0 cm van het kathodeinde van de film. Maak twee exemplaren van elk exemplaar tegelijkertijd. (3) Elektroforese: de buffer wordt geëlektroforeerd met een spoorhoeveelheid hemoglobine. De spanning is 180V en de tijd is 40min ~ 1h. (De cellen zijn duidelijk gescheiden in elke zone.) Na de elektroforese worden de elektroden uitgewisseld en kan de buffer herhaaldelijk worden gebruikt. (4) Elutie en kwantificatie HbA, HbA2 en een controlezone overeenkomend met de grootte van HbA2 werden afzonderlijk gesneden. Als abnormale Hb-zones (HbX) tegelijkertijd worden doorgesneden, worden ze in de bijbehorende buizen geplaatst. Voeg 10 ml TEB-buffer toe aan de HbA-buis, voeg 2 ml TEB-buffer toe aan elke buis, laat 30 minuten weken en schud constant. Na volledig geëlueerd te zijn. Het eluaat werd gemengd en 721 spectrofotometer met een golflengte van 413 nm. De blanco wordt op nul gesteld en de absorptie van elke buis wordt gemeten. Inspectie proces (1) Elektroforese van sporenhemoglobine: 1 Dompelfilm: De celluloseacetaatfilm drijft op het oppervlak van TEB-buffer en kan gedurende minstens 20 minuten worden gebruikt nadat deze gelijkmatig is doordrenkt en verzonken. Dit voorkomt dat bellen worden gegenereerd. 2 Punt: Verwijder de celluloseacetaatfilm en gebruik filterpapier om overtollig water te verwijderen. De hemoglobine-oplossing werd afgezogen in een micropipet en geplaatst in een concave groef van een multi-monster applicator.De hemoglobine-oplossing werd genomen door een multi-monster pipet en gespot op een matte zijde van de celluloseacetaatfilm. 1,5 tot 2 cm van het kathodeinde, de hoeveelheid spotting is ongeveer 3 tot 5 l en de normale hemoglobine-oplossing op de parallelle positie wordt gebruikt als controle. 3 Elektroforese: voeg een gelijke hoeveelheid BB-bufferoplossing toe in de buffertank aan beide zijden van de micro-elektroforesetank en gebruik een tweelaags filterpapier als zoutbrug op de celluloseacetaatmembraandrager. De film was mat tot op de bodem en de negatieve elektrode werd beëindigd door een vlek en gedurende 5 minuten geëquilibreerd. Schakel de stroom in. De spanning is 180 V, de huidige hoeveelheid is ongeveer 0,2 mA / cm en de elektroforese tijd is 20-30 minuten. De buffer in de tank kan opnieuw worden gebruikt na het schakelen van de elektroden. 4 Kleuring: de geëlektroforeerde film werd ongeveer 10 minuten in de rode kleuringsoplossing van Ponceau verwijderd en verschillende keren gespoeld met 3% azijnzuur totdat de achtergrond wit was en gedroogd. 5 Transparant: de celluloseacetaatfilm wordt gedrenkt in een transparante vloeistof, gehecht aan een schone glazen plaat en de bellen tussen de twee worden verwijderd door een glazen staaf. Een kleine hoeveelheid ijsazijn werd in een chromatografiecilinder gegoten en de glasplaat werd omgekeerd op de chromatografiecilinder bedekt (met de film naar binnen gericht). Rook met vluchtig ijsazijn gedurende 10 tot 20 minuten en verwijder de film als deze transparant is. (2) Colorimetrische kleuring van celluloseacetaatmembraanelektroforese: 1 Verwijder het 4 cm × 6 cm celluloseacetaatmembraan gedrenkt in TEB-buffer en dep overtollig water af met filterpapier. Op een afstand van 1,5 cm van het kathodeinde van het matte oppervlak werd ongeveer 5 ul van een 50 g / L Hb-oplossing lineair en uniform gepakt met een hemoglobinepipet. 2 Elektroforese: spanning 180V, tijd 30 ~ 40min, afhankelijk van volledige scheiding van Hb-zones. De elektrode wordt na elektroforese uitgewisseld en de elektroforesebuffer kan meerdere keren worden gebruikt. 3 Verven: de film wordt ondergedompeld in de verfoplossing en moet 2 uur in de winter en 25 ~ 30 ° C in de zomer worden geverfd en kan slechts ongeveer 30 minuten worden geverfd. Merk op dat als de kleuring niet transparant is (zoals de tijd is te kort of de hemoglobine-oplossing te geconcentreerd), of de spanning te hoog is, de HbA-band te geconcentreerd is en het lint gemakkelijk kan worden afgepeld, wat de nauwkeurigheid van de kwantificering beïnvloedt. Was meerdere keren met bleekoplossing totdat de achtergrond is gespoeld. 4 Kwantificering: Het gespoelde membraan werd verwijderd en elke zone werd gesneden en een controlezone overeenkomend met de grootte van HbA2 werd in elke overeenkomstige reageerbuis geplaatst. 10 ml van het percolaat werd aan de HbA-buis toegevoegd en de resterende buizen werden ondergedompeld in 2 ml, 20 minuten geweekt en van tijd tot tijd geschud. Laat het lint volledig elueren (merk op dat bij hogere temperaturen de elutietijd niet te lang moet zijn, anders zal het eluensblauw afnemen en geleidelijk paars worden). Het eluaat werd gemengd en de absorptie van elke buis werd gemeten met behulp van een 721 spectrofotometer bij een golflengte van 620 nm en op nul gesteld met een blanco. 5 berekening: dezelfde directe colorimetrie. Wasachtige zure vezelmembraanelektroforese directe colorimetrie Reagens: elektroforese met micro-hemoglobine van celluloseacetaatmembraan. Operation: (1) Het celluloseacetaatmembraan werd gesneden in 1/3 (4 cm x 8 cm) in TEB-buffer gedurende 10 minuten of meer. (2) Verwijder de celluloseacetaatfilm en gebruik een filterpapier om overtollig water te verwijderen. 10 ul van 100 g / l opgelost bloed werd geabsorbeerd door een Hb-pipet en gelijkmatig aangebracht op de onderrand van de glazen duwer en werd op de matte zijde geplaatst op een afstand van 1,5 tot 2,0 cm van het kathodeinde van de film. Maak twee exemplaren van elk exemplaar tegelijkertijd. (3) Elektroforese: elektroforese van buffer en micro-hemoglobine. De spanning is 180V en de tijd is 40min ~ 1h. (De cellen zijn duidelijk gescheiden in elke zone.) Na de elektroforese worden de elektroden uitgewisseld en kan de buffer herhaaldelijk worden gebruikt. (4) Elutie en kwantificatie HbA, HbA2 en een controlezone overeenkomend met de grootte van HbA2 werden afzonderlijk gesneden. Als abnormale Hb-zones (HbX) tegelijkertijd worden doorgesneden, worden ze in de bijbehorende buizen geplaatst. Voeg 10 ml TEB-buffer toe aan de HbA-buis, voeg 2 ml TEB-buffer toe aan elke buis, laat 30 minuten weken en schud constant. Na volledig geëlueerd te zijn. Het eluaat werd gemengd en 721 spectrofotometer met een golflengte van 413 nm. De blanco wordt op nul gesteld en de absorptie van elke buis wordt gemeten. Niet geschikt voor het publiek Geen taboes. Bijwerkingen en risico's Risico op infectie: als u een onreine naald gebruikt, loopt u mogelijk het risico op infectie.