Lymfocyt toxiciteitstest

Wanneer specifieke effector T-lymfocyten in contact worden gebracht met doelcellen in vitro, kunnen ze de eigenschap vertonen van vernietigen en lyseren van doelcellen, lymfocyttoxiciteit genoemd. De doelcel kan een tumorcel of andere weefselcel zijn. De manier waarop lymfocyten doelcellen doden, kan doelcellen vernietigen door direct doden of productie van lymfokines. Dit is de lymfocyttoxiciteitstest. Sommige lymfocyten, zoals CTL, NK, LAK, enz. Hebben een direct dodend effect op doelcellen, en afhankelijk van de aard van de te detecteren effectorcellen, kunnen de overeenkomstige doelcellen, zoals tumorcellen, transplantatiedonorcellen, enz. Worden geselecteerd. Dit experiment kan worden gebruikt in onderzoek naar tumorimmuniteit, afstoting van transplantaten, virale infectie en dergelijke. Methoden omvatten: chroomafgiftemethode, lactaatdehydrogenase afgiftemethode en apoptotische celtest. Basis informatie Specialistenclassificatie: Oncologie-onderzoeksclassificatie: immuunonderzoek Toepasselijk geslacht: of mannen en vrouwen nuchter zijn: vasten Analyse resultaten: Hieronder normaal: Normale waarde: geen Boven normaal: negatief: Normaal. positief: Op dit moment geen relevante gegevens. Tips: Houd een normale mindset aan. Normale waarde De morfologische onderzoeksmethode werd vergeleken tussen de testgroep en de controlegroep, P <0,05. 125I of 51Cr methode P> 0,05. Klinische betekenis Abnormale resultaten: deze test kan worden gebruikt als een indicator voor het meten van cellulaire immuniteit bij tumorpatiënten in vitro; het kan ook de prognose van tumorpatiënten bepalen door het vermogen van immuuncellen om tumorcellen te doden te meten; en kan ook functionele subpopulaties van lymfocyten identificeren. De te onderzoeken populatie: de kruistest voor lymfocyttoxiciteit wordt ook de complementafhankelijke cytotoxiciteitstest (CDC) genoemd. Het is om te controleren of er een donor is in de ontvanger van de orgaantransplantatie, of het HLA-antilichaam van de donor tegen de ontvanger, en moet een CDC-test uitvoeren vóór orgaantransplantatie. voorzorgsmaatregelen (1) Bij het meten van het vermogen van de betreffende lymfocyten om tumorcellen aan te vallen, werden tumorcellen en lymfocyten van de patiënt aan de experimentele groep toegevoegd en werden tumordoelcellen en kweekmedium aan de controlegroep toegevoegd. Als andere monsters zoals tumorantigenen of immunogenen, therapeutische geneesmiddelen, enz. Betrokken zijn bij cellulaire immuniteit, moet een derde groep worden toegevoegd.In deze testgroep mogen lymfocyten eerst reageren met het te testen monster en vervolgens worden gewassen en vervolgens waargenomen. Het cytotoxische effect van gesensibiliseerde lymfocyten op tumor-doelcellen. De eerste twee groepen werden op dit moment de controlegroep. (2) Het overlevingspercentage van doelcellen en lymfocyten moet in een optimale toestand zijn, in het algemeen> 90%. (3) Het kalfsserum dat aan de kweekoplossing wordt toegevoegd, moet eerst op toxiciteit worden getest. (4) Het aantal geïnoculeerde doelcellen en lymfocyten moet nauwkeurig zijn. (5) De experimentele groep en de controlegroep moeten op hetzelfde bord worden geplaatst om de fout te verminderen. (6) De pH van de kweekoplossing is met de meeste voorkeur 6,8 tot 7,2. Inspectie proces (1) Inoculatie van doelcellen: selecteer tumorcellen die goed kunnen groeien, was ze met Hank-oplossing, verteer ze met 2,5 g / L trypsine gedurende 2-3 minuten, giet de trypsine-oplossing (de cellen zitten nog steeds vast aan de fleswand) en gebruik Hank. De cellen werden 3 keer licht gewassen en de Hank-oplossing werd gegoten. De hechtende cellen werden gewassen met RPMI1640-oplossing die 10% tot 20% kalfsserum bevatte, en de celpellet werd verwijderd door filtratie door een filter van 100 mesh om een enkele tumorcelsuspensie van 1 x 106 / ml te bereiden, en de celsuspensie werd gepipetteerd met een druppelaar. Druppel in een kweekplaat met 40 putjes, 1 druppel per putje (ongeveer 100-150 cellen) en plaats de plaat gedurende 20 uur in een 5% CO2-incubator bij 37 ° C. De kweekplaat werd verwijderd en de kweekoplossing werd verwijderd. Na het kleuren van de Wright werd het gemiddelde aantal hechtende tumorcellen per 10 putjes geteld. Als het verschil tussen de twee groepen> 1/3 was, was de fout te groot om te worden gebruikt en was de fout niet groot. De kweekplaat kan formeel worden getest. (2) Scheiding van lymfocyten: Neem de heparine-antistolling 3 ml van het onderwerp, scheid de lymfocyten met de sucrose-diazepam-uitloogoplossing, was ze vervolgens 3 keer met Hank-oplossing en meng ze vervolgens met RPMI1640-oplossing (2 ~ 3) ) × 105 / ml celsuspensie. (3) Cytotoxiciteitstest: lymfocyten en doelcellen worden gemengd in een verhouding van 200: 1 en (2 ~ 3) × 104 lymfocyten (in 0,1 ml volume) worden aan elk putje toegevoegd en ongeveer 20% kalfsserum wordt per putje toegevoegd. 0,1 ml RPMI 1640-oplossing werd 40 uur in een 37 ° C 5% CO2-incubator geplaatst. De kweekplaat werd verwijderd en de kweekoplossing werd verwijderd Na het kleuren van Wright werd het aantal doelcellen dat achterbleef op de bodem van de plaat geteld onder een microscoop. Niet geschikt voor het publiek Er zijn geen taboes. Bijwerkingen en risico's Er zijn geen gerelateerde complicaties en gevaren.