Immunologische detectie van Helicobacter pylori

Helicobacter pylori immunologische tests detecteren H. pylori-infectie door Helicobacter pylori-antilichamen in serum te meten, inclusief passieve hemagglutinatie-assays, immunoblottingstechnieken en enzym-gekoppelde immunosorbent assays (ELISA). De patiënt nam de cerebrospinale vloeistof en verdunde het antigeen met de 96-well V-type hemagglutinatieplaat om het JE-antigeen te verdunnen, zodat elke well 25 ul bevatte en het te testen serum werd 1:10 verdund met elke verdunning. Voeg 25 ul toe, voeg gelyofiliseerd Japans hersenmonoklonaal antilichaam toe om 25 rode bloedcellen van schapen te sensibiliseren en bekijk de resultaten na enkele uren staan bij 37 ° C. Basis informatie Specialistenclassificatie: classificatie van groei- en ontwikkelingsonderzoek: bloedonderzoek Toepasselijk geslacht: of mannen en vrouwen nuchter zijn: vasten Tips: houd een lege maag van het examen. Normale waarde Het resultaat was negatief. Klinische betekenis Abnormale resultaten: 1. De serumagglutinatietiter van de test is 4 keer of meer dan 4 keer hoger dan de antigeencontrole. De serum antigeentiter tijdens de herstelperiode was 4 of meer keer hoger dan de acute fase en was positief. 2. Er is een speciale kleurreactie, die bewijst dat een bepaald eiwit bestaat. 3. De verhouding van het te testen serum tot het bekende negatieve serum (P / N) 2,1, en de OD-waarde van het te testen serum is 0,4, daarna wordt het als positief beoordeeld. Moet de menigte controleren: patiënten met een maagzweer. voorzorgsmaatregelen Contra-indicaties voor inspectie: let op het beschermen van de hersenen; bereid verschillende verpakkingsvloeistoffen en configureer de concentratie. Taboe bij het controleren: 1. De patiënt neemt de hersenvocht om te zitten, om het hoofd niet te beschadigen. 2. Monoklonale antilichamen die worden gebruikt om rode bloedcellen van schapen te sensibiliseren om vóór gebruik te worden gevriesdroogd. 3. De verdunning, werkingsduur en temperatuur van de primaire en secundaire antilichamen moeten vooraf worden geëxperimenteerd om de optimale omstandigheden voor verschillende eiwitten te bepalen. 4. De kleurontwikkelingsoplossing moet nieuw worden geconfigureerd en uiteindelijk worden toegevoegd aan H2O2. 5. DAB kan kanker veroorzaken, dus wees voorzichtig bij het hanteren ervan. 6. Strikt controlerende factoren die de efficiëntie van labeling beïnvloeden, zoals temperatuur, tijd, pH, enzym en hoeveelheid antilichaam. 7. Maak bij het installeren van de kolom de kolom gelijkmatig, het cilinderoppervlak is vlak en er zijn geen bellen of scheuren. Inspectie proces Ten eerste, passieve bloedstolling De patiënt nam de cerebrospinale vloeistof en verdunde het antigeen met de 96-well V-type hemagglutinatieplaat om het JE-antigeen te verdunnen, zodat elke well 25 ul bevatte en het te testen serum werd 1:10 verdund met elke verdunning. Voeg 25 ul toe en voeg 25 ul gevoelig gemaakte rode bloedcellen van schapen toe door gevriesdroogd Japans hersenmonoklonaal antilichaam en observeer de resultaten na enkele uren staan bij 37 ° C. Ten tweede, immunoblottechnologie (A) verkregen eiwitmonster: na bacteriële inductie van expressie kunnen de cellen direct worden gelyseerd door elektroforese-laadbuffer, eukaryotische cellen plus homogenisatiebuffer, mechanische of ultrasone kamertemperatuur homogenaat 0,5-1min. Het werd vervolgens 15 minuten bij 4 ° C bij 13.000 g gecentrifugeerd. Neem het supernatant als een monster. (2) Elektroforese: een elektroforese-gel werd bereid en onderworpen aan SDS-PAGE. (3) Overdracht: (semi-droge overdracht) 1. Nadat de elektroforese is voltooid, snijd de strip op de juiste grootte en equilibreer met de membraanbuffer, 5 min x 3 keer. 2. Membraanbehandeling: het filterpapier en het NC-membraan van dezelfde grootte als de strook werden voorgesneden en gedurende 10 minuten ondergedompeld in de overdrachtsbuffer. 3. Transferfilm: het filmtransferapparaat wordt in volgorde van onder naar boven geplaatst in de volgorde van anode-koolstofplaat, 24 lagen filterpapier, NC-film, gel, 24 lagen filterpapier en kathode-koolstofplaat.Het filterpapier, gel en NC-film zijn precies uitgelijnd. De bellen werden in één stap verwijderd en een gewicht van 500 g werd daarop aangebracht om de overtollige vloeistof op de koolstofplaat te drogen. Schakel de stroom in, constante stroom 1mA / cm2, overdracht 1,5 uur. Nadat de overdracht is voltooid, wordt de stroom verwijderd en wordt het membraan verwijderd en wordt de te testen strip gesneden voor immunoblotting. De standaard eiwitstrips werden gekleurd, gedurende 50 s in de membraankleuringoplossing geplaatst en vervolgens meerdere keren in 50% methanol ontkleurd tot een heldere achtergrond, vervolgens gewassen met dubbel gedestilleerd water, aan de lucht gedroogd in twee lagen filterpapier en liet kleuren De resultaten worden vergeleken. (4) Immuunrespons: 1. Was het membraan gedurende 5 minuten x 3 keer met 0,01 M PBS. 2. Voeg de coatingoplossing toe en schud voorzichtig gedurende 2 uur bij kamertemperatuur. 3. Gooi de oplossing weg en was het membraan gedurende 5 minuten x 3 keer met 0,01 M PBS. 4. Voeg primair antilichaam toe (verdund met 0,01 M PBS in een geschikte verdunningsverhouding, de vloeistof moet het hele membraan bedekken) en laat het gedurende meer dan 12 uur bij 4 ° C staan. In de negatieve controle werd het primaire antilichaam vervangen door 1% BSA en de resterende stappen waren dezelfde als in de experimentele groep. 5. Gooi het primaire antilichaam en 1% BSA weg en was het membraan 5 maal × 4 keer met 0,01 M PBS. 6. Voeg mierikswortelperoxidase-geconjugeerd secundair antilichaam toe (verdund met 0,01 M PBS bij de juiste verdunningsverhouding) en schud voorzichtig gedurende 2 uur bij kamertemperatuur. 7. Gooi het secundaire antilichaam weg en was het membraan gedurende 5 minuten x 4 keer met 0,01 M PBS. 8. Voeg de kleuroplossing toe, vermijd het licht en ontwikkel kleur totdat de band verschijnt Breng in het dubbel gedestilleerde water om de reactie te stoppen. Ten derde, bepaling van de gecombineerde adsorptie van enzymen Veelgebruikte ELISA-methoden omvatten een dubbele antilichaam-sandwichmethode en een indirecte methode, de eerste voor het detecteren van macromoleculaire antigenen en de laatste voor het meten van specifieke antilichamen. Indirecte ELISA Deze methode wordt voornamelijk gebruikt om antilichamen te detecteren. De procedure voor indirecte ELISA is als volgt. (1) Materialen 1 coatingvloeistof, wasvloeistof, warmtebeschermingsvloeistof, substraatvloeistof en stopvloeistof; 2DVH gecoat antigeen, enzym-gelabeld anti-antilichaam, negatief en positief DVH-referentieserum; 3 ELISA-detector, sampler, polystyreen microplaat. (2) Methodestappen 1 plus antigeen coating 4 ° C gedurende de nacht, driemaal gewassen, gooi droog; 2 plus te testen serum gedurende 2 uur 37 ° C, driemaal gewassen, gooi droog; 3 plus met enzym gemerkt antilichaam 37 ° C gedurende 2 uur, driemaal gewassen, gooi droog; 4 voeg substraatoplossing toe 37 ° C gedurende 30 minuten, voeg stopoplossing toe; 5 De OD-waarde werd gemeten met een ELISA-detector en de P / N-verhouding werd berekend. 2. Dubbele antilichaamsandwich ELISA Deze methode wordt voornamelijk gebruikt om macromoleculaire antigenen te detecteren. 1 plus antilichaamcoating 4 ° C gedurende de nacht, driemaal gewassen, gooi droog; 2 plus het te testen antigeen 37 ° C gedurende 30 minuten, driemaal gewassen, gooi droog; 3 plus met enzym gemerkt antilichaam 37 ° C gedurende 30 minuten, driemaal gewassen, gooi droog; 4 voeg substraatoplossing toe 37 ° C gedurende 15 minuten, voeg stopoplossing toe; 5 De OD-waarde werd gemeten met een ELISA-tester. Niet geschikt voor het publiek Niet geschikt om de menigte te controleren: geen. Bijwerkingen en risico's Geen gerelateerde complicaties of gevaren.