B-lymfocyt oppervlaktemarkers

Het testen van de humorale immuunfunctie is een soort test waarbij het laboratorium de individuele humorale immuunfunctie evalueert. De detectie van humorale immuunfunctie is gebaseerd op de basisprocessen van humorale immuniteit, waaronder B-lymfocytdetectie, Ig-detectie en detectie van antilichaamproductiefuncties. Basis informatie Specialistenclassificatie: classificatie van groei- en ontwikkelingscheck: immunologisch onderzoek Toepasselijk geslacht: of mannen en vrouwen nuchter zijn: niet vasten Tips: Als het monster niet op de dag kan worden waargenomen, worden de cellen gesuspendeerd in de fluorescerende antistofoplossing, bewaard bij 4 ° C en de volgende dag geteld. Normale waarde De gemiddelde IgM was 11,2 ± 6,0%; de gemiddelde IgG was 7,5 ± 3,3%. Klinische betekenis De afname van het aantal B-cellen houdt verband met de humorale immuundeficiëntie en de toename van het aantal B-cellen houdt verband met de kwaadaardige proliferatie van B-cellen. voorzorgsmaatregelen (1) De aanwezigheid van geagglomereerd IgG in het fluorescerende antilichaamreagens en het geagglomereerde IgG kan vals-positief gebonden zijn aan de Fc-receptor op het oppervlak van de B-cel. Daarom is het, om agglomeratie van IgG te voorkomen, aandacht aan te besteden aan: 1 Fluorescerende antilichamen met een overmatige F / P molverhouding kunnen niet worden gebruikt en in het algemeen hebben 1 tot 3 de voorkeur. 2 Fluorescerende antilichamen met lage concentratie eiwitten zijn onstabiel bij lage temperatuur en mogen niet lager zijn dan 2 mg / ml. 3 Fluorescerende antilichamen die bij lage temperatuur zijn opgeslagen, mogen niet herhaaldelijk worden ingevroren en ontdooid en 30 minuten bij 150.000 r / min worden gecentrifugeerd om aggregaten te verwijderen. (2) Wanneer levende lymfocyten worden gebruikt voor immunofluorescentiekleuring, wordt NaN3 toegevoegd aan alle reagentia (gemerkt antilichaam, Hank-oplossing, enz.) Om de vloeibaarheid van het celmembraan te beperken. Anders zullen capachtige fluorescentie en fagocytose optreden en zal het werkelijke aantal fluorescerende cellen afnemen. (3) Wanneer gekleurd met een anti-IgG fluorescerend antilichaam, bindt het antigeen-antilichaam (IgG-type) immuuncomplex in het monster aan de Fc-receptor op het oppervlak van de B-cel en is fluorescent positief. Om deze reden is voorgesteld om te kleuren met fluorescent gelabeld anti-F (ab) 2-antilichaam om Fe-receptoren uit te sluiten van het kleuren. In de afgelopen jaren is het, door de komst van monoklonale antilichamen tegen B-celoppervlak-specifieke moleculen (CD19, CD20, etc.), de neiging om met fluoresceïne gemerkte monoklonale antilichamen tegen CD19 of CD20 te gebruiken om direct te reageren met lymfocyten van perifeer bloed; De monoklonale antilichamen (primaire antilichamen) van CD19 en CD20 worden eerst gereageerd met lymfocyten, vervolgens gecombineerd met fluoresceïne-gemerkt konijn of geit anti-muis IgG (tweede antilichaam), geteld door fluorescentiemicroscopie of flowcytometrie om perifeer bloed te tellen. B-lymfocyten. Inspectie proces (1) Neem heparine-anticoagulans 2 ml, voeg een gelijke hoeveelheid Hank-vloeistof toe en meng goed. Herhaal de laag op de gelaagde oplossing, 2000 r / min, centrifugeer gedurende 20 minuten. De lymfocytenlaag werd verwijderd, de Hank-oplossing werd toegevoegd, 3 keer gewassen, 1200 r / min, 10 minuten gecentrifugeerd, de lymfocytenconcentratie werd ingesteld op 1 x 107 / ml en 0,1 ml werd in twee buizen verdeeld. (2) Was de lymfocytsuspensie opnieuw met de oplossing van Hank, gooi de bovenstaande vloeistof weg en gebruik het filterpapier om de resterende vloeistof uit de binnenwand van de buis te verwijderen en voeg 2 druppels konijn anti-menselijk IgG en anti-menselijk IgM fluorescent antilichaam (ongeveer 0,08 ml) toe. Plaats de incubator na 37 minuten zachtjes schudden gedurende 30 minuten. (3) Neem uit de incubator en was tweemaal met Hank-oplossing, centrifugeer met 1000r / min gedurende 10 minuten, absorbeer zorgvuldig alle bovenstaande vloeistof, voeg 1 druppel 50 ml PBS-gebufferde glycerine toe aan de bodem van de buis, meng en neem 1 druppel om toe te voegen Bedek het dekglaasje op de dia en observeer onder een fluorescentiemicroscoop. Niet geschikt voor het publiek Er zijn geen taboes. Bijwerkingen en risico's Geen complicaties of gevaren.