Gemengde lymfocytencultuurassay

Gemengde lymfocytencultuur (MLC) is een testmethode voor het bepalen van de mate van compatibiliteit tussen een receptor en het belangrijkste histocompatibiliteitsantigeen van een donor (HLA-antigeen) en wordt vaak gebruikt voor het matchen van weefsels voorafgaand aan orgaantransplantatie. Gemengde lymfocytencultuur is een bidirectionele gemengde cultuur van donor- en ontvanger-lymfocyten, of inactivering van donor-lymfocyten tot een gemengde cultuur, en de mate van cellulaire respons is negatief gecorreleerd met de mate van donor-ontvanger-compatibiliteit. Basis informatie Specialistenclassificatie: classificatie van groei- en ontwikkelingscheck: immunologisch onderzoek Toepasselijk geslacht: of mannen en vrouwen nuchter zijn: niet vasten Tips: mensen met een hoge afwijzing mogen deze controle niet uitvoeren. Normale waarde De conversieratio van de morfologische telmethode is <10%. De isotoop telmethode vergelijkt cpm om P> 0,05 te verkrijgen. Klinische betekenis Abnormale resultaten: Bij niertransplantatie moet de conversieratio van levende donoren <10% zijn; de conversieratio van cadaverische donoren moet> 10% zijn. Overeenstemming met lage reacties kan alleen worden gebruikt in dezelfde serie experimenten. Een lymfocytenconversie van 10% is compatibel tussen weefsels van verschillende lichamen. De lymfocyt gemengde kweektest wordt gebruikt om de immuunstatus van de patiënt te detecteren. Wanneer het aantal T-lymfocyten wordt verminderd, wordt ook de omzettingssnelheid verlaagd. Het kan worden gebruikt als een bijpassende methode voor orgaantransplantatie en beenmergtransplantatie om een geschikte donor te selecteren. Als de conversieratio hoog is, wordt deze gebruikt voor het verschil tussen de ontvanger en de ontvanger. Het conversiepercentage is laag en het succespercentage na transplantatie is hoog. Moeten mensen detecteren: Mensen met verminderde immuniteit of vermist. voorzorgsmaatregelen Op het moment van onderzoek: Deze test kan worden gebruikt als een methode voor het screenen van donoren op orgaantransplantatie.Degenen met een lage conversie hebben een hoog succespercentage en degenen met een hoog succespercentage hebben een laag succespercentage. Inspectie proces 1. Bereiding van donorlymfocyten: Vers perifeer veneus bloed werd toegevoegd aan een centrifugebuis die een oplossing voor het scheiden van lymfocyten bevat met een soortelijk gewicht van 1,077 in een verhouding van 1: 1, en voorzichtig aangebracht op het vloeistofoppervlak Centrifugeer bij 2000 r / min gedurende 20 minuten om de tussenliggende halogeenymfocytenlaag te absorberen. Tweemaal wassen Trypan-blauwe kleuring, telling van het aantal platen. Stel de celdichtheid in op 2 × 109 / L, verdeel in 3 buizen, centrifugeer afzonderlijk en laat een neerslag achter. Voeg 250 L mitomycine toe aan elke buis (eindconcentratie 50 mg / L) En 1,75 ml fysiologische zoutoplossing, waterbad bij 37 ° C gedurende 40 minuten en tweemaal gewassen met fysiologische zoutoplossing. Stel de celdichtheid in op 1 × 10 10 / L met RPMI1640-oplossing die 100 ml / L foetaal runderserum bevat. Voeg het antilichaam toe om het antigeen te blokkeren. Markeer als D. 2. Bereiding van receptor-lymfocyten: Vers perifeer veneus bloed werd toegevoegd aan een centrifugebuis die een oplossing voor het scheiden van lymfocyten bevat met een soortelijk gewicht van 1,077 in een verhouding van 1: 1, en voorzichtig aangebracht op het vloeistofoppervlak Centrifugeer bij 2000 r / min gedurende 20 minuten om de tussenliggende halogeenymfocytenlaag te absorberen. Tweemaal wassen Pas de celdichtheid aan op 1 × 1010 / L met RPMI1640-medium dat 120 ml / l foetaal runderserum bevat. 3. Gemengde lymfocytenkweek: De bereide R en D werden als volgt aan de plaat met 96 putjes toegevoegd en gedurende 24 uur bij 37 ° C in een 50 ml / L CO2-incubator gekweekt. Groep A: R50 ul + D 50 ul; Groep B: R50 ul + D50 ul + IL2-zuivering en neutralisatie van mAb 15 ul ; Groep C: R50L + IL? 2 gezuiverd en geneutraliseerd mAb 15L; Groep D: R50L Elke groep had 3 dubbele putjes en de blanco controlegroep was 100 ul RPMI1640-medium. Niet geschikt voor het publiek Niet geschikt voor mensen: mensen met een hoge afwijzing. Bijwerkingen en risico's Er zijn geen gerelateerde complicaties en gevaren.